二、形成厭氧環(huán)境

1. 第一次氮?dú)庵脫Q：

   • 把乳膠手套套在觀察板法蘭圈上并扎緊。
   • 接通氮?dú)膺M(jìn)氣路，打開氮?dú)饪刂崎y，使兩只塑料袋充足氮?dú)夂螅P(guān)閉電磁閥，然后扎緊袋口。
   • 把塑料袋內(nèi)氮?dú)鉂u漸地放于操作室內(nèi)，至全部放出。

2. 第二次氮?dú)庵脫Q：重復(fù)一次充氮過程，取樣室先抽真空，并注意隨時(shí)開閉排氣閥。

3. 第三次氮?dú)庵脫Q：再次重復(fù)充氮過程，確保操作室內(nèi)氮?dú)鉂舛取?/p>

4. 混合氣體置換（混合氣體配比根據(jù)實(shí)際需求，如N2 85%、H2 10%、CO2 5%或H2 1/85%、H2 1/10%、CO2/15%等）：

   • 調(diào)換氣路打開操作室混合氣閥進(jìn)氣，充氣時(shí)取樣室先抽真空，并注意隨時(shí)開閉排氣閥。
   • 混合氣充滿塑料袋后，關(guān)閉電磁閥，并打開混合氣限流閥，使混合氣經(jīng)過穩(wěn)流器、流量計(jì)，調(diào)整流量計(jì)使流量為每分鐘10毫升左右。
   • 把塑料袋內(nèi)混合氣漸漸排于操作室內(nèi)。通過三次換氣后，操作室內(nèi)氣體含氧量已處于極微量狀態(tài)。

5. 催化除氧：操作室內(nèi)打開鈀粒除氧劑，接通除氧催化器電源進(jìn)行催化除氧。1~2小時(shí)后（具體時(shí)間根據(jù)設(shè)備性能而定），打開厭氧指示條觀察其變色情況，如指示條變色（由深藍(lán)變?yōu)闇\藍(lán)）則為操作室內(nèi)達(dá)到厭氧環(huán)境。

三、滅菌處理

開啟紫外線滅菌燈，對(duì)操作室內(nèi)進(jìn)行滅菌處理。滅菌時(shí)間根據(jù)實(shí)驗(yàn)需求自定。

四、菌種置入與培養(yǎng)

1. 檢查并關(guān)緊取樣室內(nèi)門。
2. 打開取樣室外門：將菌種放入取樣室后即關(guān)上外門。
3. 取樣室充氮置換：打開真空泵，先抽真空度（如500毫米汞柱以上），然后人工打開氮?dú)忾y進(jìn)氣，使指針回復(fù)零位后關(guān)掉氮?dú)忾y。重復(fù)此過程三次，以確保取樣室內(nèi)氮?dú)鉂舛取５谌尾僮鲿r(shí)，可打開混合氣體閥進(jìn)混合氣，使指針回復(fù)零位后關(guān)掉混合氣體閥。
4. 檢驗(yàn)真空度：如選定真空度較低則需要增加置換的次數(shù)。取樣室外門開啟、關(guān)緊后，再抽低真空度（如100毫米汞柱）進(jìn)行檢驗(yàn)。

五、長(zhǎng)期連續(xù)使用條件

1. 定期觀察：每天在操作室內(nèi)打開厭氧指示條觀察，如指示條變色不正常則需重新?lián)Q氣。
2. 連續(xù)輸入混合氣體：要長(zhǎng)期連續(xù)輸入微量的混合氣體，使補(bǔ)進(jìn)的氮?dú)饽芎臀⒘康难踅Y(jié)合通過催化吸收，保證室內(nèi)厭氧狀態(tài)。補(bǔ)入混合氣流量可選定為每分鐘10毫升左右。
3. 更換除氧劑和干燥劑：連續(xù)培養(yǎng)運(yùn)行時(shí)，每天更換一次除氧劑和干燥劑。換下的除氧劑和干燥劑可放在200℃干燥箱內(nèi)干燥2~3小時(shí)以復(fù)原。

六、注意事項(xiàng)

1. 設(shè)備安裝：整機(jī)應(yīng)安放在溫度溫差較小、操作方便的位置，避免陽(yáng)光直曬和遠(yuǎn)離采暖設(shè)備，放置要平穩(wěn)。
2. 儀表安裝：儀表應(yīng)盡可能地安裝于空氣清靜、溫度變化較小的地方。
3. 熟悉設(shè)備：開機(jī)前應(yīng)全面熟悉和了解各組成配套儀器、儀表的說(shuō)明書，掌握正確的使用方法。
4. 故障處理：如發(fā)生故障（如停氣等），操作室內(nèi)仍可保持一段時(shí)間（如10~12小時(shí)）的厭氧狀態(tài)。超過此時(shí)間則根據(jù)需要把培養(yǎng)物取出另作處理。
5. 氣瓶更換：調(diào)換氣瓶時(shí)，注意要扎緊氣管，避免流入含氧氣體。
6. 真空泵維護(hù)：真空泵應(yīng)按要求使用，并定期檢查加油。

通過以上步驟，可以正確、有效地使用厭氧培養(yǎng)箱進(jìn)行厭氧菌的培養(yǎng)。